Method for separation of mono-, and di-saccharides with microchip capillary electrophoresis

Abstract: Biologiska läkemedel är läkemedel som tillverkas från cellodling och är en växande industri. Varje år tillverkas nya biologiska läkemedel, vilket ställer högre krav på metoder för att kunna mäta och kontrollera processparametrar av tillverkningen. Cellodlingsmediet är en viktig parameter som påverkar läkemedlets karaktär och omsättning, vilket gör att pålitliga metoder för att kunna övervaka viktiga egenskaper i cellodlingsmediet behövs. Sackarider är en komponent i cellodlingsmediet som både utgör kol- och energikälla till cellerna under odlingen. I den här avhandlingen beskrivs en metod för att separera och kvantifiera fem olika sackarider som används i cellodlingsmedium, för användning i ett automatiserat system för analys. Sackariderna laktos, mannos, glukos, fukos och galaktos derivatiserades med fluoroforen APTS och separerades med microchip-kapillärelektrofores (MCCE) och laser-inducerad fluorescencedetektion (LIF). Den här studien omfattade prover med koncentrationer i intervallet som förväntas ingå i cellodlingsmedium, 0,5 50 mM. Metoden är linjär i detta område, med R2-värden från 0,87-0,99. Migrationstiden för sackariderna var repeterbar med RSD-värden 2,35 5,47%, men RSD för topparean var 9 22,80% vilket inte är repeterbart. Fukos användes som en intern standard, vilket förbättrade RSD för topparean till 1 6,54%, som faller inom accepterade gränsen på maximalt 10%. Fyra disackarider som inte fanns i proven testades som kandidater för en intern standard, men inga slutsatser kunde göras på deras lämplighet på grund av misstag och begränsad tid. Alla 5 sackarider som testades i studien används sällan tillsammans, därför är det lämpligt att använda en sackarid som inte är med i provet som en intern standard. Resultaten från den här studien visar att metoden är både linjär och repeterbar när en intern standard används. Den här studien utgör en lovande grund för ytterligare validering på riktiga prover med cellodlingsmedium samt i den slutliga automatiserade systemet för analys.