Effekt av tid mellan avlivning och spermieextraktion : om spermiekvalitet hos tjurens bitestikelspermier

Abstract: Uppsamling av spermier från bitestikeln post mortem är en bra teknik för att bevara viktigt genetiskt material från individer som är värdefulla ur avelssynpunkt och/ eller vilda djur. Djur dör dock inte nödvändigtvis i nära anslutning till ett laboratorium med rätt utrustning och resurser för att ta till vara materialet. Denna studie syftar därför till att undersöka vilken effekt förvaring av testiklar har på bitestikelspermiernas motilitet, viabilitet och kromatinintegritet. Detta för att metoden skall kunna användas som en modell för konservering av spermier från vilda arter. Spermieprover samlades vid fyra tillfällen (dag 0; dag 1; dag 2 och dag 3 efter första provtagning) från bitestiklar ifrån 13 tjurar där en testikel från varje tjur användes som kontroll och förvarades orörd i 5°C till sista dagen. Prover samlades genom att med ett skalpellblad göra ett litet snitt i cauda epididymis, spermier samlades upp i en pipett och späddes sedan med Optixcell. Samtliga prover utvärderades avseende motilitet och kinematik med hjälp av datorassisterad spermieanalys (CASA). Plasmamembranintegritet mättes med en infärgningsteknik där antalet levande, döende och döda spermier utvärderades med flödescytometri. Kromatinintegritet mättes med hjälp av metoden spermiekromatinanalys (SCSA) som utvärderades med hjälp av flödescytometri. Resultatet visar på en signifikant minskning av både total motilitet och progressiv motilitet (p <0,0001) med tid. Det fanns däremot ingen signifikant skillnad avseende levande och döda spermier då plasmamembranintegritet mättes, däremot hade antalet döende spermier ökat signifikant från dag 1 och 2 jämfört med dag 3. Det fanns inte heller någon signifikant skillnad avseende % DFI, siffrorna var även låga vilket visar på en låg andel spermier med skadat DNA. För % HDS däremot kunde en signifikant ökning (p <0,0001) med tid iakttas. Resultatet från studien indikerar att bitestikelspermier blir påverkade av hur lång tid testikelvävnaden förvaras post mortem. Uppföljande studier behövs för att utvärdera om spermierna är kapabla att befrukta oocyter och utvecklas till blastocyster.