Isolation and Characterization of Uncultured Freshwater Bacterioplankton from Lake Ekoln and Lake Erken through Dilution-to-Extinction Approach and Molecular Analysis Tools

Abstract: Not many of the abundant freshwater bacterial groups have a representative cultured isolate. In this master thesis project, some abundant bacterioplankton from two lakes (Lake Ekoln and Lake Erken) could be isolated by a dilution-to-extinction approach. Sterilized lake water which was obtained through an ultrafiltration system was used resembling a natural medium. Specific fragments of 16s rRNA of the isolates were amplified by universal bacterial primers (27f and 1492r, 341f and 805r.) for genotyping against a freshwater sequence database and RDP training set (Version 7). A total of 33 isolates from the two lakes were taxonomically classified and revealed the isolation of typical and abundant freshwater bacteria. Original bacterial community of Lake Ekoln was also analyzed by 16S rRNA clone library construction for diversity study. Phylogenetic trees were built through neighbor-joining method by Mega (Version 5) to reveal the evolutionary relationships among database entries, obtained isolates and clones.